Il Glucagone viene prodotto dalle cellule alfa del pancreas. A livello epatico viene attivato il glicogeno con immissione di glucosio in circolo con una azione opposta a quella dell'insulina. Livelli alti di glucagone sono presenti nel glucagonoma, poliadenomatosi endocrina, insufficienza epatica e renale, diabete scompensato, morbo di Cushing. Traumi, il digiuno prolungato, le infezioni, l'eccessivo esercizio fisico, le pancreatiti, il feocromocitoma, il diabete mellito scompensato, l'uremia e l'insufficienza renale cronica determinano un aumento dei livelli di glucagone. Livelli plasmatici bassi di glucagone sono presenti invece in corso di patologie quali la fibrosi cistica, la pancreatite cronica, la pancreatite causata da tumore o dalla rimozione chirurgica del pancreas. Il paziente deve essere a digiuno nelle 12 ore che precedono il test.